MDL

Tuesday, Sep 28th

Last update02:19:25

Главная

FISH - универсальный диагностический метод 21 века

Основные области применения  флуоресцентной гибридизации ДНК in situ –  выявление предрасположенности к различным заболеваниям, наследственных и врожденных патологий, а также  дифференциальная диагностика онкологических заболеваний и мониторинг проводимой терапии.

Метод гибридизации нуклеиновых кислот in situ был разработан для локализации определенных сиквенсов (последовательностей нуклеотидов в цепи ДНК) на цитологических препаратах. Относительная простота и эффективность данного метода делают его основой многочисленных скрининговых программ.

Разработчики систем для таких методов молекулярной биологии, как полногеномное секвенирование, молекулярное кариотипирование и ПЦР анализ позиционируют их как альтернативную замену методам FISH,  умалчивая при этом о существенных недостатках альтернативных технологий. Главным преимуществом метода FISH, которым не обладают ранее упомянутые методы, является возможность визуализации структурной целостности генома, обязательной для комплексного анализа наследственных патологий. Диагностика хромосомных патологий, связаных с транслокацией и дупликацией гетерохроматина, по-прежнему недостижима при использовании такого современного метода как полногеномное секвенирование, но может быть легко проведена при использовании FISH.

 

Невозможно переоценить значимость метода FISH для центров планирования семьи. На их базе осуществляется цитогенетическое обследование как родителей, так и детей, начиная с этапа оплодотворения (преимплантационная диагностика),   в течении беременности (пренатальная диагностика) и до момента рождения (неонатальный скриниг). На данный момент российским специалистам доступен широкий перечень  ДНК-зондов, разрешенных для клинической медицины, производства голландского компании Kreatech Biotechnology. Для целей преимплантационной диагностики данной компанией были разработаны наборы зондов, позволяющие диагностировать анеуплоидии на ничтожно малом количестве биологического материала - на одной клетке бластомера (PreimpScreen Blas) или на полярном тельце (PreimpScreen PolB). На данном примере демонстрируется высокая чувствительность метода FISH, которая выводит FISH на первое место среди всех молекулярно-генетических методик.

В последние годы в мире регистрируется огромное количество онкологических заболеваний, постановка диагноза и успешное лечение которых, зачастую зависит от патоморфологических и цитологических исследований. И в данном случае метод FISH и его модификация - метод хромогенной гибридизации in situ (CISH) не теряют своей значимости. Дифференциальная диагностика солидных опухолей требует от патоморфологов параллельного изучения морфологии опухолевых клеток и амплификации онкогенов. Для экономии времени  специалистов был разработан метод CISH, который совместил в себе оба теста, образовав, таким образом, единый морфо-генетический тест. В случае онкогематологии, правильный выбор лекарственного препарата часто зависит от информации о типе хромосомных перестроек имеющихся у  пациента. Такую информацию позволяют получить ПЦР наборы для идентификации  специфических хромосомных перестроек. Не смотря на высокую специфичность ПЦР анализа, информативность данного метода может оказаться крайне низкой в случае ошибочного предположения о типе перестройки, множественных перестройках в геноме или в случае уникальных мутаций.  Перебор  многочисленных ПЦР тестов  даже при их относительно низкой стоимости может оказаться существенно выше стоимости одного теста методом FISH. Флуоресцентная гибридизация in situ оказывается незаменимой при изучении уникальных хромосомных перестроек,  для всего спектра которых невозможно разработать диагностические тесты на основе ПЦР. В свою очередь полнохромосомные ДНК-зонды обнаруживают все транслокации с участием индивидуальных хромосом, а в случая спектрального кариотипирования (многоцветного FISH) выявляются все возможные перестройки хромосом, обнаруживаемые на цитогенетическом уровне. Таким образом, высокая информативность в сочетании с высокой чувствительностью превращает метод FISH в мощный диагностический “инструмент” в руках врачей-цитогенетиков.

You are here Главная